Alejandra
M. Calderón Hernández, MV.
Andrea
Urbina Villalobos, MQC, MSc.
Laboratorio de Micología
Escuela de Medicina Veterinaria
Universidad Nacional, Heredia - Costa Rica
- Consideraciones previas a la toma de muestras
Antes de tomar y
enviar una muestra clínica a un laboratorio para estudio micológico debe
considerar lo siguiente:
A)
Laboratorio especializado: es
conveniente remitir material a un laboratorio familiarizado con el procesamiento
de muestras veterinarias, pues el diagnóstico será más certero de esta manera.
B)
Horario de recepción de muestras:
es importante conocer esta información para contar con un lapso de 12 horas
máximo para remitir el material, de esta manera se debe evitar tomar muestras
al inicio del fin de semana o cuando el día siguiente sea feriado.
C)
Servicios ofrecidos por el
laboratorio: con esto se pretende cerciorar que la muestra enviada va a ser
procesada y se cuenta con los reactivos necesarios para su diagnóstico final
(p.e. medios de cultivo especiales).
D)
Animal sin tratamiento
antifúngico, cremas o champús: el uso de antifúngicos tópicos o sistémicos,
ciertas cremas o champús pueden repercutir negativamente en el diagnóstico
micológico, por lo tanto se debe procurar que el animal no se le aplique nada
tópico o sistémico por al menos 2 semanas previas a la toma de muestra.
E)
Histopatología y citología: las
biopsias, lavados y aspirados deben ser enviadas también a un laboratorio
especializado en histopatología y citologías animales para complementar y
corroborar el diagnóstico micológico.
- Hoja de datos
Para realizar un
mejor diagnóstico se recomienda completar una hoja de datos con información relevante sobre:
A) Datos del propietario y/o médico veterinario remitente: nombre,
teléfono, fax, correo electónico, dirección, fecha de recepción de la muestra.
B) Datos epidemiológicos del animal: edad, sexo, raza, proveniencia,
identificación, cantidad de
animales afectados.
C)
Hallazgos clínicos e historia médica:
signos clínicos, tiempo de presentarlos, tipo,
cantidad y distribución de la o las lesiones, tratamientos recibidos y duración de los mismos, si está en cuadra o
en potrero, alimentación, situaciones de
estrés, traslados o salidas de la finca recientes, enfermedades crónicas o condición de portador de las mismas, si
hay secreciones describir el color, consistencia
y olor de las mismas, presencia de signos respiratorios, ganglios linfáticos
aumentados, etc. Rotular el recipiente con la identificación del animal, la
fecha y hora de la toma de muestra, el tipo de muestra y nombre del médico
veterinario remitente.
D) Sobre la muestra: tipo, cantidad, tiempo transcurrido desde la toma
de la misma, medio de transporte
utilizado.
E) Sobre los exámenes de laboratorio: indicar si se desea examen
directo y/o cultivo
- Tipos de muestras clínicas, toma y transporte
Los tipos de
muestras biológicas dependen de la presentación clínica y agente sospechado, en
el siguiente cuadro, se resumen los diferentes tipos de muestras clínicas, cómo
tomarlas y transportarlas correctamente.
Es importante el
uso de guantes para protegerse de posibles infecciones mientras se tome la
muestra.
TIPO DE MUESTRA Y UTILIDAD
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COMO SE TOMA
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TRANSPORTE
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Micosis
superficiales
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Raspados: para lesiones planas, úlceras y onicomicosis.
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Se
desinfecta el área con alcohol de 70º, se realiza con una hoja de bisturí #
20, raspando el borde de la lesión (no es necesario que sangre) y
recolectando la mayor cantidad de escamas y pelos.
|
En un
recipiente seco y estéril (placa de petri, tubo de ensayo, etc) a temperatura
ambiente. Mantener la muestra lejos de la luz solar. Viabilidad 1 semana.
|
Cinta adhesiva: Este método se utiliza en lesiones planas de tipo generalizado
sospechosas de Malassezia pachydermatis
y dermatitis interdigitales.
|
Se
debe colocar la parte adhesiva sobre la superficie que se desea muestrear y
despegar rápidamente.
|
Pegar
la cinta adhesiva a un portaobjetos con la parte adhesiva hacia arriba, se
pega con la ayuda de otra cinta
adhesiva en los extremos del portaobjetos. Temperatura ambiente.
Si la muestra es fijada con
metanol, la viabilidad es de 3 días.
|
Improntas: para lesiones superficiales ulcerativas o con algún tipo de
secresión.
|
Se
realiza con un portaobjetos limpio y se presiona sobre la superficie que
desea muestrearse (previamente desinfectada con alcohol de 70º)
|
En
una placa de petri limpia con la parte de la muestra hacia arriba o bien en
la caja de los portaobjetos con algodón. Temperatura ambiente. Fijar en metanol
para tinción de Giemsa.
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Hisopados: se utiliza para tomar muestras de cavidades corporales (oídos, boca,
narinas, vagina, ano, prepucio, cloaca) o bien de lesiones supurativas con el
fin de cultivarlas.
|
Con la ayuda de un hisopo largo
estéril, se rozan las paredes de la
cavidad o bien la superficie deseada. Tomar siempre 2 muestras, unas para el
frotis y otra para el cultivo.
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En un
tubo de plástico estéril con tapa, preferiblemente con un medio de transporte
líquido, puede ser solución salina estéril 2 ml. Transportar a 4ºC.
Viabilidad con medio de transporte y frío 24 horas, sin medio de transporte 4
horas.
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Frotis: se utiliza para recolectar el material de un hisopado de lesiones
húmedas, cavidades u obtenidas por raspado (p.e. levaduras intracelulares).
|
Se
debe rodar el hisopo sobre la superficie del portaobjetos dejando al menos 3
líneas impregnadas.
|
Se
puede transportar un porta- portaobjetos o bien de la misma manera que la
cinta adhesiva, la viabilidad es la misma y a la misma temperatura. Fijar en
metanol en caso de sospecha de levaduras intracelulares.
|
Barridos de pelambre: se utiliza para recolectar esporas de hongos presentes en la
superficie de los animales y así determinar portadores de dermatofitos.
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Un
trozo de alfombra estéril o cepillo, se pasa sobre el pelo del animal.
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Se
guarda en un recipiente estéril (placa de petri, papel kraf), a temperatura
ambiente, lejos de la luz solar. Viabilidad 2 semanas.
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Pelos, costras, escamas,
plumas, espinas: para lesiones alopécicas y
descamativas.
|
Se
deben arrancar el pelo, plumas, espinas, costras o las escamas que estén en
los bordes de la lesión, con la ayuda de pinzas limpias o guantes.
|
Tranporte,
viabilidad y tempertatura igual que los raspados.
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Micosis
subcutáneas y cutáneas
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||
Aspirados: son de utilidad en
lesiones ulcerativas, nodulares y polifistulosas.
|
Se
realiza con una aguja de calibre 18 o 16 y una jeringa de 3 cc. El émbolo
debe estar en la marca de 1cc y se punza varias veces la superficie. Ese
material es expulsado sobre un portaobjetos limpio y después, se puede
aspirar más contenido para que se realice el cultivo.
|
Se
pueden transportar en la jeringa donde se recolectó el material o bien en un
tubo de ensayo estéril, a 4ºC. La viabilidad es de 24 horas a esa temperatura
y con solución salina, si no se mantiene a esa temperatura dura 2 horas. Si
la muestra es muy poca se debe adicionar 1 cc de solución salina estéril.
|
Raspados: Sirven para tomar
material de lesiones ulcerativas, supurativas y polifistulosas.
|
Con ayuda de una hoja de bisturí #
20, limpiándo el área con solución salina estéril a presión, se retira la
mayor cantidad de material posible.
|
El
material recolectado, se deposita en un tubo de ensayo o placa de petri
estéril y se desechar el bisturí, pues se oxida con la sangre y dificulta el
diagnóstico. Para que la muestra no se seque, puede adicionarse 2 cc de
solución salina estéril. Conservar a 4ºC. Viabilidad 12 horas.
|
Biopsia: es la muestra más
confiable en caso de lesiones nodulares o pólipos.
|
Se
puede hacer tipo punch o con bisturí, siempre del borde de la lesión. Tomar
suficiente muestra para envíar estudio histopatológico y micológico.
|
La
porción que se envía para estudio micológico no se debe congelar!!!, ni
colocar en formalina, sino transportar a no menos de 4ºC porque algunos
de los hongos pueden morir a bajas temperaturas. Adicionar solución salina
estéril para evitar que la muestra se seque. Viabilidad 24 horas.
|
Improntas: son de utilidad en
lesiones ulcerativas, supurativas y polifistulosas.
|
Se
realizan de la misma forma que en micosis superficiales.
|
Ver
improntas en micosis superficiales.
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Frotis: se utiliza para
transportar material de los aspirados y raspados.
|
Se
expulsa sobre la superficie del portaobjetos el material del aspirado. Si se
trata de un raspado, se debe esparcir el material en el portaobjetos.
|
Ver
frotis en micosis superficiales.
|
Clavos de espundia: para
aislar Pythium insidiosum, elaboración
de autovacuna.
|
Son
unas masas formadas por detritos celulares y restos de Pythium insidiosum. Es la muestra más confiable para detectar
este agente en estas lesiones. Se deben retirar lo más asépticamente posible
con ayuda de una pinza estéril y limpiando previamente el área con solución
salina estéril.
|
Enviar
en un tubo de 50ml estéril, adicionado con solución salina fisiológica,
preferiblemente a 4ºC. Viabilidad de la muestra: 2 días.
|
Córnea: para determinar la presencia de
queratomicosis
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Debe
retirarse de forma aséptica una porción de la córnea afectada, realizando un
raspado profundo con una hoja de bisturí # 10.
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Se
transporta en un recipiente estéril como placa de petri con 5 gotas de
solución salina fisiológica estéril. Llevarse de inmediato al laboratorio a
4ºC. Viabilidad de la muestra: 2 horas.
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Micosis
profundas o diseminadas
|
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Lavados: bronqueoalveolar, traqueal, de los sacos aéreos, del buche. Sirven
para el diagnóstico de hongos que han ingresado por inhalación p.e.
histoplasmosis, aspergilosis, blastomicosis, criptococosis, etc.
|
Se
realizan infiltrando a presión solución salina estéril en el área que se va
muestrear y recolectando la mayor cantidad posible con una bomba de vacío o
una jeringa adaptada a un venoclísis.
|
Ver
aspirados en micosis subcutáneas y cutáneas.
|
Líquido
cefalorraquídeo: es de ayuda diagnóstica en el caso
de histoplasmosis diseminada o bien criptococosis.
|
Con
el animal completamente anestesiado, se extrae el líquido cefaloraquídeo del
canal medular en la articulación atlanto-occipital.
|
Se
debe transportar en un tubo estéril con tapa, o en la jelinga en la que se
extrajo, a 4°C, de forma inmediata, viabilidad 1 hora.
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Aspirados: traqueales, nasales, de líquido sinovial y de cavidades.
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La
toma debe ser lo más aséptica posible, de igual manera que las micosis
subcutáneas y cutáneas.
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Ver
aspirados en micosis subcutáneas y cutáneas.
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Biopsias: es la muestra que mayor información provee, sin embargo, en el animal
vivo es difícil de obtener (p.e. pulmón).
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Se
toma de manera aséptica, con pinzas biopsiadoras, aguja “easytrap”,
sacabocados o bisturí.
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Ver
biopsias en micosis cutáneas y subcutáneas.
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Sangre o suero: son de ayuda diagnóstica en el caso de que los laboratorios cuenten
con pruebas para determinación de inmunoglobulinas contra diferentes
antígenos fúngicos.
Los frotis sanguíneos de sangre preservada con
anticoagulante, pueden ayudar al diagnóstico de histoplasmosis diseminada.
|
Puede tomarse de la vena yugular,
cefálica o safena, con anticoagulante cuando se sospecha de histoplasmosis o
sin anticoagulante para determinación de inmunoglobulinas.
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Transportarlo
en un tubo sin anticoagulante evitándo la hemólisis (máximo 5 horas) o bien,
el suero separado en un tubo de ependorff de 1.5ml. El suero puede
refrigerarse o congelarse. Viabilidad es de 1 semana (en refrigeración) y
congelado a
-20ºC puede durar años.
|
- Tiempo de espera de los
resultados
Es importante recordar que el tiempo de espera
de los resultados varían con el tipo de muestra y examen realizado, de esta
manera:
A) Exámenes directos de biopsias, raspados,
aspirados, lavados, frotis, improntas, cinta adhesiva, pelos y costras: los
resultados se obtienen el mismo día.
B) Cultivos: los agentes fúngicos presentan un
creciemiento entre los 3 a 22 días, sin embargo en algunas ocasiones se
requiere más tiempo para la identificación de las especies y/o géneros ya que se
requiere de medios especiales de esporulación y de cultivos en lámina
adicionales.
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